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顯微成像·洞察微觀之美
Microscopic imaging, insight into the beauty of micro
倒置顯微鏡與(yu) 相差顯微鏡有何區別?
發布時間:2024-12-06
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倒置顯微鏡通常屬於(yu) 相差顯微鏡
倒置顯微鏡是一種結構型態,相差顯微鏡是一種功能劃分,兩(liang) 者無法直接對比。
倒置顯微鏡配備相差環板來實現相差
倒置生物顯微鏡通常屬於(yu) 相差顯微鏡。倒置顯微鏡的透射光源在載物台上,物鏡在載物台下,故稱“倒置顯微鏡”。倒置生物顯微鏡的透射光源和物鏡都是長工作距離設計,通常會(hui) 配備推拉式相差環板和相差物鏡,可實現相差觀察功能,以便觀察接近透明的未染色細胞等樣品。
正置也能實現相差(升級熒光和相差後的CX43)
正置顯微鏡也可以實現相襯觀察,隻是相對少見。簡易的正置相襯使用類似倒置的推拉式相差環板,搭配帶插槽的聚光鏡,由於(yu) 尺寸更小,精密度要求更高,而且可能還會(hui) 有漏光等問題,更可靠的設計是轉盤式切換的聚光鏡,這是很多專(zhuan) 業(ye) 品牌正置顯微鏡實現相襯切換的思路。
相差可以觀察透明細胞樣本
相差顯微鏡指能進行相差觀察的顯微鏡,相差觀察又稱相襯觀察、澤尼克相襯法觀察,是一種利用相位差物理原理提升透明樣品對比度的技術,主要用於(yu) 未染色的細胞等樣品,這些樣品在明場下幾乎是透明的,難以看清,而染色則會(hui) 影響其活性因而不適用,通過相差觀察,樣品物質和厚度的差異將會(hui) 轉化成對比度,從(cong) 而揭示明場觀察無法看清的細節。
相差不適合看厚的和楔形的樣品,升級DIC解決(jue)
相差觀察的優(you) 點很明顯,它可以不用染色就看清培養(yang) 皿中的細胞和水中的微生物等樣品,十分方便且實現成本低,局限在於(yu) 不適合厚度大的樣品,以及楔型結構的樣品,這些樣品可能需要用DIC微分幹涉相襯或者HMC霍夫曼調製相襯來進行觀察,前者具有非常好的立體(ti) 感和極佳的細節表現能力,但成本極高,後者雖然會(hui) 有色差問題,但能以顯著更低的成本實現類似DIC的強立體(ti) 感,適合批量部署,因此在IVF輔助生殖等領域會(hui) 有應用。
除常規相差,還有特殊的負相差
相襯觀察還有正負和對比度高低之分,常見的相襯是正相襯,背景是亮色的,樣品被高亮光環包圍。而負相襯背景呈暗色,類似暗場,樣品主體(ti) 會(hui) 呈高亮。負相差物鏡有高對比(NH)和中對比度(NM)區別,會(hui) 標記在物鏡上。
無限遠倒置熒光顯微鏡合成圖像
最後還有一點需要補充的是,固定筒長顯微鏡和無限遠光學顯微鏡在相襯使用上的一個(ge) 區別。在切換相襯和熒光觀察方式時,需要把光學元件移入和移出光路,對於(yu) 固定筒長顯微鏡來說,額外的光學元件移入後,需要做補償(chang) 以滿足固定筒長需要,作為(wei) 結果,不同觀察方式會(hui) 有一定的成像倍率差異,視野不是完全一致的。
無限遠光學顯微鏡可以做到相襯成像視野和熒光成像視野完全一致,因此可以拍攝合成出有輪廓感/立體(ti) 感的細胞熒光圖像。一般這需要先用平場消色差相襯物鏡拍攝相襯,然後切換到半複消色差物鏡拍攝熒光,以免損失熒光亮度,為(wei) 了方便用戶進行這種拍攝,明美還推出了半複消色差相襯物鏡,可以一個(ge) 物鏡把相襯和熒光都拍好。
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